Pwoteyin DELLA yo konsèveregilatè kwasans yoki jwe yon wòl santral nan devlopman plant an repons a siyal entèn ak ekstèn. Kòm regilatè transcriptional yo, DELLA yo mare nan faktè transcription (TFs) ak histon H2A atravè domèn GRAS yo epi yo rekrite pou aji sou pwomotè yo. Etid resan yo te montre ke estabilite DELLA reglemante apre tradiksyon pa de mekanis: poliubiquitination pwovoke pa òmòn nan plant.giberellin, ki mennen nan degradasyon rapid yo, ak konjigezon ak ti ubiquitin-like modifier (SUMO), ki ogmante akimilasyon yo. Anplis, aktivite DELLA kontwole dinamikman pa de mekanis glikozyasyon diferan: O-fucosylation amelyore entèraksyon DELLA-TF, tandiske modifikasyon N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) ki lye nan O inibit entèraksyon DELLA-TF. Sepandan, wòl fosforilasyon DELLA a pa klè paske etid anvan yo te montre rezilta konfli, ak kèk sijere ke fosforilasyon ankouraje oswa reprime degradasyon DELLA ak lòt moun sijere ke fosforilasyon pa afekte estabilite yo. Isit la, nou idantifye sit fosforilasyon nan represor GA1-3 (RGA), AtDELLA, pirifye soti nan Arabidopsis thaliana pa espektrometri mas epi montre ke fosforilasyon de peptides RGA nan rejyon PolyS ak PolyS / T amelyore aktivite RGA pa ankouraje H2A obligatwa ak RGA asosyasyon ak pwomotè sib. Miyò, fosforilasyon pa te afekte entèraksyon RGA-TF oswa estabilite RGA. Etid nou an revele yon mekanis molekilè kote fosforilasyon pwovoke aktivite DELLA.
Analiz mas spectrometric nou an te revele ke tou de Pep1 ak Pep2 te trè fosforil nan RGA nan background nan GA-defisyan Ga1. Anplis etid sa a, etid fosfoproteomik yo te revele tou fosforilasyon Pep1 nan RGA, byenke wòl li poko te etidye53,54,55. Kontrèman, fosforilasyon Pep2 pa te deja dekri paske peptide sa a te kapab sèlman detekte lè l sèvi avèk transjèn RGAGKG la. Malgre ke mitasyon m1A a, ki te aboli fosforilasyon Pep1, se sèlman yon ti kras redwi aktivite RGA nan planta, li te gen yon efè aditif lè konbine avèk m2A nan diminye aktivite RGA (figi siplemantè 6). Sa ki enpòtan, fosforilasyon Pep1 te siyifikativman redwi nan mutan sly1 GA-enhanced konpare ak ga1, ki sijere ke GA ankouraje defosforilasyon RGA, diminye aktivite li yo. Mekanis nan ki GA siprime fosforilasyon RGA mande pou plis envestigasyon. Yon posibilite se ke sa a reyalize atravè règleman an nan yon kinaz pwoteyin idantifye. Malgre ke etid yo te montre ke ekspresyon nan CK1 pwoteyin kinaz EL1 a se downregulated pa GA nan rice41, rezilta nou yo endike ke pi wo-lòd mitasyon nan Arabidopsis EL1 homologue (AEL1-4) pa diminye fosforilasyon RGA. An akò ak rezilta nou yo, yon etid fosfoproteomik ki sot pase ki te itilize Arabidopsis AEL liy overexpressing ak yon trip mutant ael pa t idantifye okenn pwoteyin DELLA kòm substra kinas sa yo56. Lè nou te prepare maniskri a, yo te rapòte ke GSK3, jèn ki kode yon GSK3/SHAGGY kinase ki sanble nan ble (Triticum aestivum), ka fosforil DELLA (Rht-B1b)57, byenke fosforilasyon Rht-B1b pa GSK3 pa te konfime nan planta. Reyaksyon anzimatik in vitro nan prezans GSK3 ki te swiv pa analiz mas spectrométrie revele twa sit fosforilasyon ki sitiye ant domèn DELLA ak GRAS nan Rht-B1b (figi siplemantè 3). Ranplasman serin ak alanin nan tout twa sit fosforilasyon te lakòz diminye aktivite Rht-B1b nan ble transjenik, ki konsistan avèk rezilta nou yo ke sibstitisyon alanin nan Pep2 RGA diminye aktivite RGA. Sepandan, tès degradasyon nan vitro pwoteyin plis demontre ke fosforilasyon ka estabilize tou Rht-B1b57. Sa a se kontrèman ak rezilta nou yo ki montre ke sibstitisyon alanin nan Pep2 RGA pa chanje estabilite li nan planta. GSK3 nan ble se yon ortholog nan brassinosteroid-ensansib pwoteyin 2 (BIN2) nan Arabidopsis 57. BIN2 se yon regilatè negatif nan siyal BR, ak BR aktive chemen siyal li yo pa sa ki lakòz degradasyon BIN2 58. Nou te montre ke tretman BR pa diminye RGA estabilite 59 oswa phosphorylation nivo ki sigjere GA 2, Supplementarya ki sikjere nan Figi 2. BIN2 pa gen anpil chans pou yo fosforil.
Tout done quantitative yo te analize estatistik ak Excel, epi yo te detèmine diferans enpòtan yo lè l sèvi avèk T-tès Student la. Pa gen okenn metòd estatistik yo te itilize pou pre-detèmine gwosè echantiyon. Pa gen okenn done yo te eskli nan analiz la; eksperyans la pa te randomized; ak chèchè yo te okouran de alokasyon an pandan eksperyans la ak evalyasyon rezilta yo. Gwosè echantiyon yo bay nan lejand figi yo ak nan dosye done anvan tout koreksyon yo.
Tan pòs: Apr-15-2025