Pwoteyin DELLA yo konsèveregilatè kwasanski jwe yon wòl santral nan devlopman plant an repons a siyal entèn ak ekstèn. Kòm regilatè transkripsyon, DELLA yo mare ak faktè transkripsyon (TF) ak iston H2A atravè domèn GRAS yo epi yo rekrite pou aji sou pwomotè yo. Etid resan yo montre ke estabilite DELLA a reglemante apre tradiksyon pa de mekanis: poliubikitinasyon pwovoke pa òmòn plant lanjiberelin, sa ki mennen nan degradasyon rapid yo, ak konjigezon ak yon ti modifikatè ki sanble ak ubiquitin (SUMO), ki ogmante akimilasyon yo. Anplis, aktivite DELLA a reglemante dinamikman pa de mekanis glikozilasyon distenk: O-fukozilasyon amelyore entèraksyon DELLA-TF, alòske modifikasyon N-asetilglukozamin ki lye ak O (O-GlcNAc) anpeche entèraksyon DELLA-TF. Sepandan, wòl fosforilasyon DELLA a pa klè paske etid anvan yo te montre rezilta kontradiktwa, kèk ki sijere ke fosforilasyon ankouraje oswa repouse degradasyon DELLA ak lòt ki sijere ke fosforilasyon pa afekte estabilite yo. La a, nou idantifye sit fosforilasyon nan represè GA1-3 (RGA), AtDELLA, pirifye soti nan Arabidopsis thaliana pa espektrometri mas epi nou montre ke fosforilasyon de peptid RGA nan rejyon PolyS ak PolyS/T yo amelyore aktivite RGA lè li ankouraje lyezon H2A ak asosyasyon RGA ak pwomotè sib yo. Li enpòtan pou note ke fosforilasyon pa t afekte entèraksyon RGA-TF oswa estabilite RGA. Etid nou an revele yon mekanis molekilè kote fosforilasyon pwovoke aktivite DELLA.
Analiz espektwometri mas nou an te revele ke tou de Pep1 ak Pep2 te trè fosforile nan RGA nan kontèks Ga1 ki defisyan an GA. Anplis etid sa a, etid fosfoproteomik yo te revele tou fosforilasyon Pep1 nan RGA, byenke wòl li poko etidye53,54,55. Okontrè, fosforilasyon Pep2 pa te dekri anvan paske peptid sa a te ka sèlman detekte lè l sèvi avèk transjèn RGAGKG la. Malgre ke mitasyon m1A a, ki te aboli fosforilasyon Pep1, te sèlman redwi aktivite RGA yon ti kras nan planta, li te gen yon efè aditif lè yo te konbine avèk m2A nan rediksyon aktivite RGA (Figi Siplemantè 6). Sa ki enpòtan, fosforilasyon Pep1 te siyifikativman redwi nan mutant sly1 ki te amelyore ak GA a konpare ak ga1, sa ki sijere ke GA ankouraje defosforilasyon RGA, sa ki diminye aktivite li. Mekanis ke GA itilize pou siprime fosforilasyon RGA a mande plis envestigasyon. Yon posibilite se ke sa a reyalize atravè règleman yon pwoteyin kinaz ki pa idantifye. Malgre ke etid yo montre ke ekspresyon pwoteyin kinaz CK1 EL1 la diminye pa GA nan diri41, rezilta nou yo endike ke mitasyon ki pi wo nan omolog Arabidopsis EL1 (AEL1-4) la pa diminye fosforilasyon RGA. An akò ak rezilta nou yo, yon etid fosfoproteomik resan ki itilize liy Arabidopsis AEL ki sureksprime ak yon trip mutan ael pa t idantifye okenn pwoteyin DELLA kòm substrats kinaz sa yo56. Lè nou te prepare maniskri a, yo te rapòte ke GSK3, jèn ki kode yon kinaz ki sanble ak GSK3/SHAGGY nan ble (Triticum aestivum), ka fosforile DELLA (Rht-B1b)57, byenke fosforilasyon Rht-B1b pa GSK3 pa te konfime nan planta. Reyaksyon anzimatik in vitro an prezans GSK3 ki te swiv pa analiz espektwometri mas te revele twa sit fosforilasyon ki sitiye ant domèn DELLA ak GRAS Rht-B1b yo (Fig. Siplemantè 3). Sibstitisyon serin an alanin nan tout twa sit fosforilasyon yo te lakòz yon diminisyon nan aktivite Rht-B1b nan ble transjenik, ki konsistan avèk rezilta nou yo ke sibstitisyon alanin nan Pep2 RGA te diminye aktivite RGA. Sepandan, tès degradasyon pwoteyin in vitro te demontre plis ke fosforilasyon kapab tou estabilize Rht-B1b57. Sa a an kontras ak rezilta nou yo ki montre ke sibstitisyon alanin nan Pep2 RGA pa chanje estabilite li nan planta. GSK3 nan ble se yon òtològ nan pwoteyin 2 ki pa sansib a brassinosteroid (BIN2) nan Arabidopsis 57. BIN2 se yon regilatè negatif nan siyalizasyon BR, epi BR aktive chemen siyalizasyon li lè li lakòz degradasyon BIN2 58. Nou te montre ke tretman BR pa diminye estabilite RGA 59 oswa nivo fosforilasyon nan Arabidopsis (Figi Siplemantè 2), ki sijere ke RGA gen anpil chans pou l pa fosforile pa BIN2.
Tout done kantitatif yo te analize estatistikman lè l sèvi avèk Excel, epi diferans enpòtan yo te detèmine lè l sèvi avèk tès t Student la. Pa gen okenn metòd estatistik ki te itilize pou predetèmine gwosè echantiyon an. Pa gen okenn done ki te eskli nan analiz la; eksperyans lan pa te owaza; epi chèchè yo te okouran de alokasyon an pandan eksperyans lan ak evalyasyon rezilta yo. Gwosè echantiyon yo bay nan lejann figi yo ak nan dosye done brit yo.
Dat piblikasyon: 15 avril 2025