Etid sa a evalye letalite, subletalite, ak toksisite nan komèsyal yosipèmetrinfòmilasyon pou anuran teen. Nan tès egi a, yo te teste konsantrasyon 100-800 μg / L pou 96 èdtan. Nan tès kwonik la, yo te teste konsantrasyon cypermetrin natirèlman (1, 3, 6, ak 20 μg/L) pou mòtalite, ki te swiv pa tès micronucleus ak anomali nikleyè globil wouj nan san pandan 7 jou. LC50 fòmilasyon komèsyal cypermethrin nan teta te 273.41 μg L−1. Nan tès kwonik la, konsantrasyon ki pi wo a (20 μg L-1) te lakòz plis pase 50% mòtalite, paske li te touye mwatye nan teta yo teste. Tès micronucleus la te montre rezilta enpòtan nan 6 ak 20 μg L-1 ak plizyè anomali nikleyè yo te detekte, ki endike ke fòmilasyon komèsyal cypermethrin la gen potansyèl jenotoksik kont P. gracilis. Cypermethrin se yon gwo risk pou espès sa a, ki endike ke li ka lakòz plizyè pwoblèm ak afekte dinamik yo nan ekosistèm sa a nan kout ak long tèm. Se poutèt sa, li ka konkli ke fòmilasyon komèsyal cypermethrin gen efè toksik sou P. gracilis.
Akòz ekspansyon kontinyèl nan aktivite agrikòl ak aplikasyon entansif nankontwòl ensèk nuizibmezi, bèt akwatik yo souvan ekspoze a pestisid1,2. Polisyon nan resous dlo tou pre jaden agrikòl ka afekte devlopman ak siviv òganis ki pa sib tankou anfibyen.
Anfibyen yo ap vin de pli zan pli enpòtan nan evalyasyon matris anviwònman an. Anuran yo konsidere kòm bon endikatè nan polyan anviwònman an akòz karakteristik inik yo tankou sik lavi konplèks, to kwasans rapid lav, estati twofik, po pèmeyab10,11, depandans sou dlo pou repwodiksyon12 ak ze san pwoteksyon11,13,14. Ti krapo dlo a (Physalaemus gracilis), souvan ke yo rekonèt kòm krapo ki kriye, yo te montre yo dwe yon espès bioindicator nan polisyon pestisid4,5,6,7,15. Yo jwenn espès la nan dlo ki kanpe, nan zòn ki pwoteje oswa nan zòn ki gen abita varyab nan Ajantin, Irigwe, Paragwe ak Brezil1617 epi klasifikasyon IUCN la konsidere kòm stab akòz distribisyon lajè li ak tolerans diferan abita yo18.
Efè subletal yo te rapòte nan anfibyen apre ekspoze a sipèmetrin, ki gen ladan chanjman konpòtman, mòfolojik ak byochimik nan tadpoles23,24,25, chanjman mòtalite ak tan metamòfoz, chanjman anzimatik, diminye siksè kouve24,25, ipèaktivite26, anpèchman nan aktivite kolinesteraz27, chanjman nan pèfòmans naje27,28. Sepandan, etid sou efè jenotoksik sipermetrin nan anfibyen yo limite. Se poutèt sa, li enpòtan pou evalye sansiblite espès anuran yo nan sipermetrin.
Polisyon nan anviwònman an afekte kwasans nòmal ak devlopman anfibyen, men efè negatif ki pi grav se domaj jenetik ADN ki te koze pa ekspoze pestisid13. Analiz mòfoloji selil san se yon endikatè enpòtan nan polisyon ak toksisite potansyèl yon sibstans nan espès sovaj29. Tès micronucleus la se youn nan metòd ki pi souvan itilize pou detèmine genotoksisite pwodwi chimik yo nan anviwònman an30. Li se yon metòd rapid, efikas ak chè ki se yon bon endikatè nan polisyon chimik nan òganis tankou anfibyen31,32 epi ki ka bay enfòmasyon sou ekspoze a polyan jenotoksik33.
Objektif etid sa a se te evalye potansyèl toksik fòmilasyon komèsyal cypermethrin nan ti teen akwatik lè l sèvi avèk yon tès mikronukle ak evalyasyon risk ekolojik.
Mòtalite kimilatif (%) nan P. gracilis teen ekspoze a diferan konsantrasyon nan sipermetrin komèsyal pandan peryòd egi nan tès la.
Mòtalite kimilatif (%) nan P. gracilis teen ekspoze a diferan konsantrasyon nan sipermetrin komèsyal pandan yon tès kwonik.
Obsève segondè mòtalite a te yon rezilta nan efè jenotoksik nan anfibyen ki ekspoze a diferan konsantrasyon nan sipermetrin (6 ak 20 μg / L), jan sa evidan nan prezans nan mikronuclei (MN) ak anomali nikleyè nan eritrosit. Fòmasyon MN endike erè nan mitoz epi li asosye ak move lyezon kwomozòm nan mikrotubul, defo nan konplèks pwoteyin ki responsab pou absorption kwomozòm ak transpò, erè nan segregasyon kwomozòm ak erè nan reparasyon domaj ADN38,39 epi yo ka gen rapò ak estrès oksidatif pestisid pwovoke40,41. Lòt anomali yo te obsève nan tout konsantrasyon evalye. Ogmante konsantrasyon cypermethrin ogmante anomali nikleyè nan eritrosit pa 5% ak 20% nan dòz ki pi ba (1 μg / L) ak pi wo (20 μg / L), respektivman. Pa egzanp, chanjman nan ADN yon espès yo ka gen konsekans grav pou siviv kout ak alontèm, sa ki lakòz yon bès popilasyon an, chanjman nan kapasite repwodiktif, ensanguin, pèt divèsite jenetik, ak chanjman nan to migrasyon yo. Tout faktè sa yo ka afekte siviv ak antretyen espès yo42,43. Fòmasyon anòmal erythroid ka endike yon blòk nan sitokinèz, sa ki lakòz divizyon selil nòmal (eritrosit binucleated)44,45; nwayo miltilobe yo se protrusion manbràn nikleyè a ki gen plizyè lob46, alòske lòt anomali eritroyid yo ka asosye ak anplifikasyon ADN, tankou ren nikleyè/bouch47. Prezans eritrosit anucleated ka endike transpò oksijèn ki gen pwoblèm, espesyalman nan dlo ki kontamine48,49. Apoptoz endike lanmò selil50.
Lòt etid yo te demontre tou efè jenotoksik sipermetrin. Kabaña et al.51 te demontre prezans mikronukle ak chanjman nikleyè tankou selil binukle ak selil apoptotik nan selil Odontophrynus americanus apre yo fin ekspoze a gwo konsantrasyon sipermetrin (5000 ak 10,000 μg L-1) pou 96 èdtan. Cypermethrin-induit apoptoz te tou detekte nan P. biligonigerus52 ak Rhinella arenarum53. Rezilta sa yo sijere ke cypermethrin gen efè jenotoksik sou yon seri òganis akwatik e ke tès MN ak ENA a ka yon endikatè efè subletal sou anfibyen epi li ka aplikab a espès natif natal ak popilasyon sovaj ki ekspoze a toksik12.
Fòmasyon komèsyal cypermethrin reprezante yon gwo danje pou anviwònman an (tou de egi ak kwonik), ak Siège ki depase nivo US Environmental Protection Agency (EPA)54 ki ka afekte espès yo yon fason negatif si yo prezan nan anviwònman an. Nan evalyasyon risk kwonik la, NOEC pou mòtalite a te 3 μg L−1, sa ki konfime ke konsantrasyon yo jwenn nan dlo ka reprezante yon risk pou espès la55. NOEC letal pou lav R. arenarum ekspoze a yon melanj de endosulfan ak sipèmetrin te 500 μg L−1 apre 168 èdtan; valè sa a diminye a 0.0005 μg L−1 apre 336 èdtan. Otè yo montre ke plis ekspoze a pi long, se pi ba konsantrasyon ki danjere pou espès yo. Li enpòtan tou mete aksan sou ke valè NOEC yo te pi wo pase sa yo ki nan P. gracilis nan menm tan an ekspoze, ki endike ke repons espès la nan sipermetrin se espès espesifik. Anplis de sa, an tèm de mòtalite, valè CHQ nan P. gracilis apre ekspoze a sipèmetrin te rive nan 64.67, ki se pi wo pase valè referans etabli pa Ajans Pwoteksyon Anviwònman Ameriken an54, ak valè CHQ nan lav R. arenarum te tou pi wo pase valè sa a (CHQ > 388.00 apre 336.00 apre 336 h yo), ki endike ke ensektisid yo gen anpil risk. espès yo. Lè nou konsidere ke P. gracilis mande apeprè 30 jou pou konplete metamòfoz56, li ka konkli ke konsantrasyon yo etidye nan cypermethrin ka kontribye nan n bès popilasyon lè yo anpeche moun ki enfekte antre nan etap adilt oswa repwodiktif nan yon laj byen bonè.
Nan evalyasyon risk kalkile mikronuclei ak lòt anomali nikleyè eritrosit yo, valè CHQ yo te varye ant 14.92 ak 97.00, sa ki endike ke cypermethrin te gen yon risk potansyèl jenotoksik pou P. gracilis menm nan abita natirèl li yo. Lè w ap pran an kont mòtalite, konsantrasyon maksimòm konpoze ksenobiotik toleran P. gracilis te 4.24 μg L-1. Sepandan, konsantrasyon osi ba ke 1 μg / L te montre tou efè jenotoksik. Reyalite sa a ka mennen nan yon ogmantasyon nan kantite moun ki pa nòmal57 epi afekte devlopman ak repwodiksyon espès nan abita yo, ki mennen nan yon bès nan popilasyon anfibyen.
Fòmasyon komèsyal nan cypermethrin ensektisid la te montre gwo toksisite egi ak kwonik nan P. gracilis. Pi gwo pousantaj mòtalite yo te obsève, gen anpil chans akòz efè toksik, jan sa evidan nan prezans nan mikronukle ak erythrocyte nikleyè anomali, espesyalman nwayo krante, nwayo lobed, ak nwayo vesikulèr. Anplis de sa, espès yo etidye te montre ogmante risk anviwònman an, tou de egi ak kwonik. Done sa yo, ansanm ak etid anvan gwoup rechèch nou an, te montre ke menm diferan fòmilasyon komèsyal nan sipermetrin toujou te lakòz diminye aktivite asetilkolinesteraz (AChE) ak butirilkolinesteraz (BChE) ak estrès oksidatif58, e ki te lakòz chanjman nan aktivite naje ak malformasyon oral59 nan P. gracilis, ki endike ke fòmilasyon letal ak subtoksik komèsyal yo gen anpil letal. espès sa a. Hartmann et al. 60 te jwenn ke fòmilasyon komèsyal nan sipèmetrin se te pi toksik nan P. gracilis ak yon lòt espès nan menm genus (P. cuvieri) konpare ak nèf lòt pestisid. Sa a sijere ke konsantrasyon legalman apwouve nan sipermetrin pou pwoteksyon anviwònman an ka lakòz gwo mòtalite ak n bès popilasyon alontèm.
Gen plis etid ki nesesè pou evalye toksisite pestisid la pou anfibyen yo, paske konsantrasyon yo jwenn nan anviwònman an ka lakòz gwo mòtalite epi reprezante yon risk potansyèl pou P. gracilis. Yo ta dwe ankouraje rechèch sou espès anfibi yo, paske done sou òganis sa yo ra, sitou sou espès brezilyen yo.
Tès toksisite kwonik la te dire pou 168 èdtan (7 jou) nan kondisyon estatik ak konsantrasyon subletal yo te: 1, 3, 6 ak 20 μg ai L-1. Nan tou de eksperyans yo, yo te evalye 10 teta pou chak gwoup tretman ak sis replike, pou yon total de 60 teta pou chak konsantrasyon. Pandan se tan, tretman an sèlman dlo te sèvi kòm yon kontwòl negatif. Chak konfigirasyon eksperimantal fèt nan yon plat vè esteril ak yon kapasite de 500 ml ak yon dansite 1 teta pou chak 50 ml solisyon. Flacon a te kouvri ak fim polyethylene pou anpeche evaporasyon e li te kontinyèlman aere.
Dlo a te analize chimikman pou detèmine konsantrasyon pestisid nan 0, 96, ak 168 èdtan. Dapre Sabin et al. 68 ak Martins et al. 69, analiz yo te fèt nan laboratwa analiz pestisid (LARP) nan Federal University of Santa Maria lè l sèvi avèk gaz chromatografi makonnen ak trip kwadripol mas spèktrometri (Varian modèl 1200, Palo Alto, Kalifòni, USA). Detèminasyon quantitative pestisid nan dlo yo montre kòm materyèl siplemantè (Tablo SM1).
Pou tès micronucleus (MNT) ak tès anomali nikleyè selil wouj (RNA), yo te analize 15 teta nan chak gwoup tretman. Tadpoles yo te anestezi ak 5% lidokayin (50 mg g-170) ak echantiyon san yo te kolekte pa pike kadyak lè l sèvi avèk sereng eparinize jetab. Fwoti san yo te prepare sou glisad mikwoskòp esteril, lè sèk, fiks ak 100% metanol (4 °C) pou 2 min, ak Lè sa a, tache ak 10% solisyon Giemsa pou 15 min nan fè nwa. Nan fen pwosesis la, glisad yo te lave ak dlo distile pou retire depase tach epi seche nan tanperati chanm.
Yo te analize omwen 1000 RBC nan chak teta lè l sèvi avèk yon mikwoskòp 100 × ak yon objektif 71 pou detèmine prezans MN ak ENA. Yo te evalye yon total de 75,796 RBC ki soti nan teen an konsidere konsantrasyon ak kontwòl sipèmetrin. Genotoksisite te analize selon metòd Carrasco et al. ak Fenech et al.38,72 lè yo detèmine frekans blesi nikleyè sa yo: (1) selil anucleate: selil san nwayo; (2) selil apoptotik: fwagmantasyon nikleyè, lanmò selil pwograme; (3) selil binucleate: selil ki gen de nwayo; (4) boujon nikleyè oswa selil bleb: selil ki gen nwayo ki gen ti protrusions nan manbràn nikleyè a, bleb ki sanble nan gwosè ak mikronkle; (5) selil karyolize: selil ki gen sèlman deskripsyon nwayo a san materyèl entèn; (6) selil anko: selil ki gen nwayo ki gen fant evidan oswa echanjman nan fòm yo, yo rele tou nwayo ki gen fòm ren; (7) selil lobulated: selil ki gen protrusion nikleyè ki pi gwo pase vesik yo mansyone pi wo a; ak (8) mikroselil: selil ki gen nwayo kondanse ak sitoplasm redwi. Chanjman yo te konpare ak rezilta kontwòl negatif yo.
Rezilta tès toksisite egi (LC50) yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl GBasic ak metòd TSK-Trimmed Spearman-Karber74. Done tès kwonik yo te pre-teste pou nòmal erè (Shapiro-Wilks) ak omojeneite nan divèjans (Bartlett). Rezilta yo te analize lè l sèvi avèk yon sèl-fason analiz divèjans (ANOVA). Yo te itilize tès Tukey a pou konpare done ant yo, epi yo te itilize tès Dunnett pou konpare done ant gwoup tretman an ak gwoup kontwòl negatif.
Done LOEC ak NOEC yo te analize lè l sèvi avèk tès Dunnett la. Tès estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl Statistica 8.0 (StatSoft) ak yon nivo siyifikasyon 95% (p <0.05).
Tan poste: Mar-13-2025