Plant ak materyèl patojèn
Doktè Pat Brown nan University of Illinois (kounye a nan UC Davis) te bay yon popilasyon kat asosyasyon sorgo ke yo rekonèt kòm popilasyon konvèsyon sorgo (SCP). Li te dekri deja epi li se yon koleksyon divès liy konvèti nan fotoperyod-ensansibilite ak pi piti wo pou fasilite kwasans ak devlopman plant yo nan anviwònman US. 510 liy ki soti nan popilasyon sa a te itilize nan etid sa a byenke akòz move jèminasyon ak lòt pwoblèm kontwòl kalite, se pa tout liy yo te itilize nan analiz la nan tout twa karakteristik. Alafen done ki soti nan 345 liy yo te itilize pou analiz la nan repons la chitin, 472 liy pou repons lan flg22, ak 456 pou rezistans TLS.B. Cookeisouch LSLP18 te jwenn nan men Dr Burt Bluhm nan University of Arkansas.
Mezi repons MAMP
De diferan MAMP yo te itilize nan etid sa a flg22, (Genscript catalogue # RP19986), ak chitin. Plant sorgo yo te grandi nan foure mete sou plat plen ak tè (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) nan lakòz efè tèmik la. Plant yo te wouze jou anvan koleksyon echantiyon an pou evite imidite fèy siplemantè nan jou koleksyon an.
Liy yo te owaza epi, pou rezon lojistik, yo te plante nan lo 60 liy. Pou chak liy, yo te plante twa 'po' ak de grenn pou chak liy. Pakèt ki vin apre yo te plante le pli vit ke pakèt anvan an te trete jiskaske tout popilasyon an te evalye. De kouri eksperimantal yo te fèt pou tou de MAMP yo ak jenotip re-randomize nan chak nan de kouri yo.
Yo te fè tès ROS jan sa dekri deja. Yon ti tan, pou chak liy, sis grenn yo te plante nan 3 po diferan. Soti nan plant yo ki kapab lakòz, twa yo te chwazi ki baze sou inifòmite. Seedlings ki te sanble etranj oswa ki te siyifikativman pi wo oswa pi kout pase majorite a pa te itilize. Kat fèy disk ki gen 3 mm dyamèt yo te retire nan pati ki pi laj nan 4yèm fèy la nan twa diferan plant sorgo ki gen 15 jou. Yon disk pou chak fèy soti nan de plant ak de disk soti nan yon plant, ak dezyèm disk la vin kontwòl dlo a (gade anba a). Disk yo te flote endividyèlman sou 50 µl H20 nan yon plak nwa 96-byen, sele ak yon sele aliminyòm pou evite ekspoze a limyè, epi kenbe nan tanperati chanm lannwit lan. Nan denmen maten, yo te fè yon solisyon reyaksyon lè l sèvi avèk 2 mg/ml sond chemiluminesan L-012 (Wako, katalòg # 120-04891), 2 mg/ml peroksidaz refor (Tip VI-A, Sigma-Aldrich, katalòg # P6782), ak 100 mg/ml Chitin oswa 2 μM nan Flg22. 50 µl nan solisyon reyaksyon sa a te ajoute nan twa nan kat pwi yo. Katriyèm pi a te yon kontwòl mock, nan ki solisyon an reyaksyon eksepte MAMP la te ajoute. Kat pi vid ki gen sèlman dlo yo te enkli tou nan chak plak.
Apre yo fin ajoute solisyon reyaksyon an, yo te mezire luminesans la lè l sèvi avèk SynergyTM 2 milti-deteksyon microplate reader (BioTek) chak 2 minit pou 1 èdtan. Lektè plak la pran mezi luminesans chak 2 minit pandan 1 èdtan sa a. Yo te kalkile sòm tout 31 lekti yo pou bay valè pou chak pi. Valè estimasyon pou repons MAMP pou chak jenotip te kalkile kòm (valè luminesans mwayèn nan twa pwi eksperimantal yo—valè mock well) -mwens valè an mwayèn vid. Valè pi vid yo te toujou pre zewo.
Disk fèy nanNicotiana benthamiana, yon sèl liy sorgo ki gen anpil repons (SC0003), ak yon liy ki ba anpil repons (PI 6069) yo te enkli tou kòm kontwòl nan chak plak 96-pi pou rezon kontwòl kalite.
B. Cookeipreparasyon inokulan ak inokulasyon
B. Cookeiinoculum te prepare jan sa dekri anvan an. Yon ti tan, grenn sorgo yo te tranpe nan dlo pou twa jou, rense, skoup nan 1L flakon konik ak otoklav pou yon èdtan nan 15psi ak 121 °C. Grenn yo te Lè sa a, vaksinen ak apeprè 5 ml nan miseli masere soti nan yon kilti fre nanB. CookeiLSLP18 izole epi kite pou 2 semèn nan tanperati chanm, souke flakon yo chak 3 jou. Apre 2 semèn, grenn sorgo ki te enfekte ak chanpiyon yo te cheche nan lè a epi yo te estoke nan 4 °C jiskaske inokulasyon jaden an. Yo te itilize menm inokil la pou tout esè a epi yo te fè fre chak ane. Pou inokulasyon, yo te mete 6-10 grenn ki enfekte nan worl plant sorgo ki gen 4-5 semèn. Espò ki pwodui nan fongis sa yo inisye enfeksyon nan plant sorgo jenn nan yon semèn.
Preparasyon grenn
Anvan plante nan jaden an, grenn sorgo te trete ak yon melanj fonjisid, ensektisid, ak sekirite ki gen ~ 1% Spirato 480 FS fonjisid, 4% Sebring 480 FS fonjisid, 3% Sorpro 940 ES grenn sekirite. Lè sa a, grenn yo te seche lè pou 3 jou ki te bay yon kouch mens nan melanj sa a alantou grenn yo. Sekirite a pèmèt itilizasyon èbisid Dual Magnum kòm yon tretman pre-aparisyon.
Evalyasyon rezistans tach fèy sib
SCP a te plante nan Central Crops Research Station nan Clayton, NC sou 14-15 jen 2017 ak 20 jen 2018 nan yon konsepsyon blòk konplè owaza ak de replikasyon eksperimantal nan chak ka. Eksperyans yo te plante nan ranje sèl 1.8 m ak yon lajè ranje 0.9 m lè l sèvi avèk 10 grenn pou chak simityè. De ranje fwontyè yo te plante alantou periferik chak eksperyans pou anpeche efè kwen. Eksperyans yo te vaksine 20 jiyè 2017 ak 20 jiyè 2018 nan ki pwen plant sorgo yo te nan etap kwasans 3. Evalyasyon yo te pran sou yon balans youn a nèf, kote plant ki pa montre okenn siy maladi yo te bay nòt kòm yon nèf ak konplètman. plant mouri yo te bay nòt kòm youn. De evalyasyon yo te pran an 2017 ak kat lekti nan 2018 kòmanse de semèn apre vaksinasyon chak ane. sAUDPC (zòn estandadize anba koub pwogresyon maladi) te kalkile jan sa dekri anvan an.
Lè poste: Apr-01-2021