Materyèl plant ak patojèn
Doktè Pat Brown nan Inivèsite Illinois (kounye a nan UC Davis) te bay yon popilasyon pou mape asosyasyon sorgho (SCP) ke yo rekonèt kòm popilasyon konvèsyon sorgho (SCP). Yo te dekri li deja e li se yon koleksyon liy divès ki konvèti an ensansibilite fotoperyòd ak pi piti pou fasilite kwasans ak devlopman plant yo nan anviwònman ameriken yo. Yo te itilize 510 liy nan popilasyon sa a nan etid sa a, byenke akòz move jèminasyon ak lòt pwoblèm kontwòl kalite, yo pa t itilize tout liy yo nan analiz twa karakteristik yo. Finalman, yo te itilize done ki soti nan 345 liy pou analiz repons kitin lan, 472 liy pou repons flg22 la, ak 456 pou rezistans TLS.B. cookeiYo te jwenn souch LSLP18 la nan men Dr. Burt Bluhm nan Inivèsite Arkansas.
Mezi repons MAMP
Nan etid sa a, yo te itilize de MAMP diferan, flg22 (katalòg Genscript # RP19986), ak kitin. Plant sorgho yo te grandi nan foure ki te poze sou plat ki te ranpli ak tè (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) nan sèr la. Plant yo te wouze jou anvan koleksyon echantiyon an pou evite imidite siplemantè nan fèy yo nan jou koleksyon an.
Liy yo te chwazi o aza, epi pou rezon lojistik, yo te plante yo an gwoup 60 liy. Pou chak liy, yo te plante twa 'po' ak de grenn pou chak liy. Yo te plante lòt gwoup apre yo te fin trete gwoup anvan an jiskaske yo te fin evalye tout popilasyon an. Yo te fè de sesyon eksperimantal pou tou de MAMP yo ak jenotip yo te re-re-o aza nan chak nan de sesyon yo.
Tès ROS yo te fèt jan yo te dekri deja. An brèf, pou chak liy, yo te plante sis grenn nan 3 po diferan. Nan plant ki te sòti yo, yo te chwazi twa dapre inifòmite yo. Yo pa t itilize plant ki te sanble dwòl oswa ki te siyifikativman pi wo oswa pi kout pase majorite a. Yo te retire kat disk fèy ki gen 3 mm dyamèt nan pati ki pi laj nan 4yèm fèy twa plant sorgho diferan ki gen 15 jou. Yo te retire yon disk pou chak fèy nan de plant ak de disk nan yon plant, dezyèm disk la te vin kontwòl dlo a (gade anba a). Yo te fè disk yo flote endividyèlman sou 50 µl H20 nan yon plak nwa 96-pi, yo te sele yo ak yon sele aliminyòm pou evite ekspozisyon a limyè, epi yo te kenbe yo nan tanperati chanm pandan tout lannwit lan. Nan denmen maten, yo te fè yon solisyon reyaksyon avèk 2 mg/ml sond chimiluminesan L-012 (Wako, katalòg # 120-04891), 2 mg/ml peroksidaz raifò (Tip VI-A, Sigma-Aldrich, katalòg # P6782), ak 100 mg/ml Chitin oubyen 2 μM Flg22. Yo te ajoute 50 µl nan solisyon reyaksyon sa a nan twa nan kat pi yo. Katriyèm pi a te yon kontwòl fo, yo te ajoute solisyon reyaksyon an san MAMP la. Yo te mete kat pi vid ki gen dlo sèlman nan chak plak tou.
Apre yo te fin ajoute solisyon reyaksyon an, yo te mezire liminesans lan lè l sèvi avèk yon lektè mikwoplak milti-deteksyon SynergyTM 2 (BioTek) chak 2 minit pandan 1 èdtan. Lektè plak la pran mezi liminesans chak 2 minit pandan 1 èdtan sa a. Yo te kalkile sòm tout 31 lekti yo pou bay valè a pou chak pi. Yo te kalkile valè estime pou repons MAMP pou chak jenotip kòm (valè liminesans mwayèn twa pi eksperimantal yo—valè pi fo a) - mwens valè mwayèn pi vid la. Valè pi vid yo te toujou pre zewo.
Disk fèy yoNicotiana benthamiana, yo te enkli tou yon liy sorgho ki gen yon repons trè rapid (SC0003), ak yon liy sorgho ki gen yon repons ki ba (PI 6069) kòm temwen nan chak plak 96-pi pou rezon kontwòl kalite.
B. cookeipreparasyon ak inokilasyon inokulum
B. cookeiYo te prepare inokulum nan jan yo te dekri deja. An brèf, yo te tranpe grenn sorgho yo nan dlo pandan twa jou, yo te rense yo, yo te mete yo nan flakon konik 1L epi yo te pase yo nan otoklav pandan inèdtan a 15psi ak 121 °C. Apre sa, yo te inokile grenn yo ak anviwon 5 ml miselyòm masere ki soti nan yon kilti fre nanB. cookeiYo te izolat LSLP18 yo epi yo te kite yo pandan 2 semèn nan tanperati chanm, pandan y ap souke flakon yo chak 3 jou. Apre 2 semèn, grenn sorgho ki te enfekte ak chanpiyon an te seche nan lè a epi yo te estoke yo a 4 °C jiskaske yo te inokile nan jaden an. Yo te itilize menm inokilòm nan pou tout esè a epi yo te fè l fre chak ane. Pou inokilasyon an, yo te mete 6-10 grenn enfekte nan vèrnitur plant sorgho ki gen 4-5 semèn. Espò ki te pwodui nan chanpiyon sa yo te inisye enfeksyon nan jèn plant sorgho yo nan yon semèn.
Preparasyon grenn
Anvan yo te plante grenn sorgho nan jaden an, yo te trete grenn sorgho yo ak yon melanj fonjisid, ensektisid, ak pwoteksyon kont grenn ki gen apeprè 1% fonjisid Spirato 480 FS, 4% fonjisid Sebring 480 FS, ak 3% pwoteksyon kont grenn Sorpro 940 ES. Apre sa, yo te seche grenn yo nan lè a pandan 3 jou, sa ki te bay yon kouch mens melanj sa a otou grenn yo. Pwoteksyon kont grenn yo a te pèmèt itilizasyon èbisid Dual Magnum kòm yon tretman pre-lejans.
Evalyasyon rezistans tach fèy sib la
Yo te plante SCP a nan Estasyon Rechèch Rekòt Santral nan Clayton, NC nan dat 14-15 jen 2017 ak 20 jen 2018 nan yon konsepsyon blòk konplè o aza ak de replikasyon eksperimantal nan chak ka. Yo te plante eksperyans yo nan ranje endividyèl 1.8 m ak yon lajè ranje 0.9 m lè l sèvi avèk 10 grenn pou chak teren. Yo te plante de ranje fwontyè toutotou periferi chak eksperyans pou anpeche efè kwen. Yo te inokile eksperyans yo nan dat 20 jiyè 2017 ak 20 jiyè 2018, nan pwen sa a plant sorgho yo te nan etap kwasans 3. Yo te pran evalyasyon yo sou yon echèl de youn a nèf, kote plant ki pa montre okenn siy maladi yo te resevwa yon nòt nèf epi plant ki konplètman mouri yo te resevwa yon nòt youn. Yo te pran de evalyasyon an 2017 ak kat lekti an 2018 apati de semèn apre inokilasyon chak ane. Yo te kalkile sAUDPC (zòn estandize anba koub pwogresyon maladi a) jan yo te dekri sa deja.
Dat piblikasyon: 1ye avril 2021